做western样品处理问题如果我要把单抗转到NC膜上进行一抗二抗反应,那应该怎么处理,上电泳前一煮不就失活了吗,请说明一下理由比如我要测一个单抗,把它转膜上,然后加抗原,再加二抗,

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/18 09:11:18
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做western样品处理问题
如果我要把单抗转到NC膜上进行一抗二抗反应,那应该怎么处理,上电泳前一煮不就失活了吗,请说明一下理由
比如我要测一个单抗,把它转膜上,然后加抗原,再加二抗,这样可行吗,那转膜上的单抗怎么处理,
如果是细胞表面分泌的蛋白呢,

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转膜并不是把单抗转上去,而是把总蛋白给转到膜上,便于后面一抗二抗反应.电泳前煮蛋白样品是让蛋白变性,由空间折叠构象变成线性的结构,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳后,能按照分子量大小依次排开.抗原抗体反应并不需要有活性的蛋白.
你的单抗仍然是蛋白,其实仍然是蛋白印迹,是需要变性的.试问假如按照你的思路,抗原根本是多余的了,你直接用二抗结合一抗不就行了吗?然后二抗上带有酶,再进行显色反应.

为什么要把单抗转膜?
不太明白你的问题。

做western样品处理问题如果我要把单抗转到NC膜上进行一抗二抗反应,那应该怎么处理,上电泳前一煮不就失活了吗,请说明一下理由比如我要测一个单抗,把它转膜上,然后加抗原,再加二抗, western内参选择我做的是组织样品,但由于处理时可能会引起细胞凋亡而使骨架蛋白如tublin或actin损失,而有的样品不做这样的处理.那选这两个做内参就不合适了.我想请教下是否有其他的蛋白可 做western,彩色的marker跑的胶上了,考马斯亮蓝没染出样品的蛋白条带.是样品的问题还是胶有问题? 做western bloting 如何确定蛋白样品的体积 大鼠的肺组织做western前怎么处理,我的其中要检测的蛋白有磷酸化的,需要加磷酸酶抑制剂吗? 真核表达分泌型蛋白,有信号肽序列的质粒转染293T细胞,western鉴定,那么转染之后上清和细胞怎样收样?主要是样品的收集问题,我做western阳性对照都出来了,但是待检样做不出来,细胞核上清要分 新手做植物富集重金属实验,请问植物样品叶片已自然风干,还可以继续做该实验吗?刚刚开始我的实验,要做植物检测重金属和有机污染物的实验.一周前把植物样品采回来,没来得及处理,拖了一 英语翻译由于我们把样品和箱包都做在同一张订单里,发票和送货单由系统自动生成的全部内容,我没法分成2套单据,如果你必须要单独箱包的发票和送货单,我可以列份表格给你,但格式就和之 英语翻译如果我厂处理完相关程序,我将把样品寄给你 我做western时从细胞中提取我要的目的蛋白,用的是RIPA蛋白裂解液,裂解后样品特别粘稠,这样算裂解成功么 western blotting 中为什么要进行蛋白样品的定量? BCA蛋白定量法BSA及样品用什么稀释?我测得是组织蛋白浓度.我用的是百泰生的裂解液,后续做western 液相色谱当样品发生化学反应出现杂质峰时应该怎么积分我在做一个样品时,在样品主峰的前面出现一个峰占的比例还大,标样没有这个峰如果单积主峰,样品的含量就比实际含量少好多点,有没 石墨炉原子吸收光谱法处理样品时要注意哪些问题? 做western处理蛋白时煮过头了会蛋白降解吗?做western,收下来的蛋白加好loading buffer后98度煮了一个小时...期间盖子盖紧了水分没有跑掉请问这样子的蛋白样品还能用吗? 做蛋白转染要怎么处理蛋白样品?能用0.22μm抽滤吗? 做western blot 时 为什么要把基因转到酵母里面 薄层色谱样品如何处理我做的是机合成,我想知道薄层色谱试样如果是粉末该如何选择溶剂再点样,对照样也需同一溶剂吗?溶剂选择展开剂有联系吗?