作业帮怎么去除细菌染色体DNA中的质粒DNA?我的生物分子实验课程的作业要求设计实验方案提取染色体DNA,但是我不知道怎么剔除染色体DNA下面是书上提供的参考方法：1 用LB培养基培养细菌：讲保存
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/29 08:39:12
怎么去除细菌染色体DNA中的质粒DNA?我的生物分子实验课程的作业要求设计实验方案提取染色体DNA,但是我不知道怎么剔除染色体DNA下面是书上提供的参考方法：1 用LB培养基培养细菌：讲保存
怎么去除细菌染色体DNA中的质粒DNA?
我的生物分子实验课程的作业要求设计实验方案提取染色体DNA,但是我不知道怎么剔除染色体DNA
下面是书上提供的参考方法：
1 用LB培养基培养细菌：讲保存菌种接种于LB液体培养基,37度,150r/min振摇过夜
2 取1ml菌液,以12000r/min离心5min,弃上清液,将沉淀溶于200ul丙酮中振摇混匀,冰浴5min,以8000r/min离心2min.弃上清液,将沉淀溶于TE缓冲液中(40mmol/LTris,PH8.0),振荡混匀,以8000r/min离心5min讲沉淀重新悬浮于400ul裂解液中（20g/L SDS,20mmol/L乙酸钠 PH5.2 ,40mmol/L Tris PH8.0,10mmol/L EDTA PH8.0）反复吹打混匀.
3 冰浴5min,然后70-70度温育20min,再加入100ul 5mol/L NaCl,以14000r/min 离心10min,上清液中加入100ul 酚-氯仿-异戊醇混合液（25：24：1）,混匀后以8000r/min离心5min.
4 上清液中加2倍体积预冷无水乙醇,以14000r/min离心5min.DNA沉淀溶于500ul 70%乙醇,以10000r/min 离心1-2min.
5 DNA沉淀溶于30ul TE缓冲液,置-20度保存备用.
我觉得这个方法好像没有提出质粒DNA和RNA,还是说他们相对分子质量比染色体DNA小的多,所以在哪部离心中已经被剔除了?
怎么去除细菌染色体DNA中的质粒DNA?我的生物分子实验课程的作业要求设计实验方案提取染色体DNA,但是我不知道怎么剔除染色体DNA下面是书上提供的参考方法：1 用LB培养基培养细菌：讲保存
你的表述前后用词矛盾,到底是要提取基因组DNA,还是要提取质粒DNA啊?要去除RNA很简单,加点RNA酶就行了,如果说要去除质粒DNA,这个实验还真奇怪了,你选用没有搭载质粒的菌株提取基因组不就行了么,实在不行,你试试看参考碱裂解小提质粒的方法,然后把上清去除,沉淀里面就有基因组DNA,然后酚氯仿去除蛋白（这方法我可没用过,只是理论可行）,还有一种方法,用trizol,离心分离的时候,DNA存在于有机相,按照说明书回收了,然后过个普通小提试剂盒的亲和层析柱子,那柱子结合不了太大的DNA,但是质粒能结合上去,所以就把质粒DNA去除掉了.（这方法我也没用过,理论可行）.哎,我们都是要提取质粒去除基因组,你是反过来,真没遇到过,因为现在使用的细菌都有空载单纯宿主啊,你别把质粒转进去不就不用去除质粒了么.还有一种更损的招,含有质粒的宿主,你不加相应抗生素,不停传代培养,质粒会在分裂传代过程中丢失,总有一天你会得到一个不含质粒的菌株的,然后提取基因组DNA．