关于PCR的问题?问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的,如果不加行不行?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/06 17:28:50
关于PCR的问题?问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的,如果不加行不行?

关于PCR的问题?问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的,如果不加行不行?
关于PCR的问题?
问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的,如果不加行不行?

关于PCR的问题?问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的,如果不加行不行?
1、预变性(Initial denaturation).
模板DNA完全变性对PCR能否成功至关重要,一般95℃加热3-5分钟.
2、引物退火(Primer annealing)
退火温度一般需要凭实验(经验)决定.
退火温度对PCR的特异性有较大影响.
3、引物延伸
引物延伸一般在72℃进行(Taq酶最适温度).
延伸时间随扩增片段长短而定.
4、循环中的变性步骤
循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性:
变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败.
5、循环数
大多数PCR含25-35循环,过多易产生非特异扩增.
6、最后延伸
在最后一个循环后,反应在72℃维持
可见94度左右应该是在这个温度能使各种靶DNA序列完全变性,这是生物学家已经研究的理论成果,72度是Taq酶最适温度,只有在这个温度下,该酶的活性才能达到最大!

关于PCR的问题?问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的,如果不加行不行? PCR在每次循环中,变性所用的时间是一样多的? PCR问题,溶解曲线只在荧光染料PCR中有么?代表那些数据间的关系. pcr需要注意的问题 关于RT-PCR的问题RT-PCR 第一步是一个反转录(reverse transcription),请问这一步之后所形成的cDNA是单链还是双链的呢? 求助关于荧光定量PCR的CT值问题 PCR 关于生物技术方面的 关于PCR扩增技术的 关于PCR合成的问题PCR扩增方向是5‘到3’,那它用的引物在扩增的时候方向是怎么的呀? 氨基酸饥饿和PCR问题1.什么是氨基酸饥饿?细菌表型会发生怎样的变化?2.PCR预变性时间过长或者过短对于PCR产物有什么影响? 在做pcr的操作过程中需注意哪些问题? 关于细菌PCR扩增产物的问题,PCR扩增产物有特异性条带,怎么修改PCR程序消除?以及PCR程序是不是有问题,PCR程序应该怎么改?DNA可以用来做PCR吗?3.PCR反应程序细菌16SrDNA V3区扩增:95°C 5min;93°C 30 关于PCR的问题:PCR如果目的基因扩增出来了是不是条带中的引物二聚体就没有了呀? 46.下列关于PCR的陈述错误的是A.PCR循环包括模板变性、引物复性和核苷酸合成B.PCR要用热稳定的DNA聚合酶C.PCR反应需要4种dNTP参与D.理想的PCR引物要长度和G+C含量都相似答案D.为什么?我 今天看了一个关于PCR技术的解说,是这么说的,目的基因DNA受热变性分解成单链,引物与单链相应互补结合,在聚合酶的 作用下延伸.还有说原理是利用DNA双链复制的原理.1,目的基因2,基因变性,难 聚丙烯酰胺凝胶电泳变性与非变性的有什么不同?PCR产物的电泳 做PCR反应为什么在循环开始前要热变性5min再正式进入第一次的循环 如何检验PCR产物是否变性