PCR的问题最近在扩一段果蝇基因,得用CDNA做模板大概2K,60度以下扩不出来,60度以上扩出来的全是杂带.总之大家能想到的都试过,咋回事呢?那段基因引物是不是很好设,能用的都用了,26个碱基

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/06 07:42:20
PCR的问题最近在扩一段果蝇基因,得用CDNA做模板大概2K,60度以下扩不出来,60度以上扩出来的全是杂带.总之大家能想到的都试过,咋回事呢?那段基因引物是不是很好设,能用的都用了,26个碱基

PCR的问题最近在扩一段果蝇基因,得用CDNA做模板大概2K,60度以下扩不出来,60度以上扩出来的全是杂带.总之大家能想到的都试过,咋回事呢?那段基因引物是不是很好设,能用的都用了,26个碱基
PCR的问题
最近在扩一段果蝇基因,得用CDNA做模板大概2K,60度以下扩不出来,60度以上扩出来的全是杂带.总之大家能想到的都试过,咋回事呢?
那段基因引物是不是很好设,能用的都用了,26个碱基的引物,扩基因组能扩出来。克隆的基因确实是低丰度表达的。55度都扩不出来,高温的扩出来都是杂带。以前用别人的CDNA跟用我刚P的CDNA结果是一样的,据说用CDNA扩2K的片段很难。

PCR的问题最近在扩一段果蝇基因,得用CDNA做模板大概2K,60度以下扩不出来,60度以上扩出来的全是杂带.总之大家能想到的都试过,咋回事呢?那段基因引物是不是很好设,能用的都用了,26个碱基
1、跑个胶看RNA质量及有无降解,杜绝RNase的污染.
2、引物适合吗?
3、克隆的基因是低丰度表达的吗?如果是,扩增起来不是很顺利的.
4、上面都没问题的话,试着降低退火温度看看.
你参考一下,这里有RT-PCR常见问题与分析:
嗯.我是这么认为的,实验的引物、反应条件和反应体系都好解决.检测cDNA模板质量是关键.像目的基因的丰度(找到该目的片段丰度比较高的细胞来进行PCR,会有较好的效果),片段长度(长片段逆转录时逆转录酶的效率不高,建议分段扩增),RNA酶是否存在,都会影响cDNA模板质量.在保证cDNA模板质量前提下,建议从比较低的温度开始,待扩出目的片断后,再适当提高退火温度减少非特异带.别看我很懂得样子,实际做起来就是很辛苦.

引物特异性不高?

qq里说好了。

来个touch down看看,或者不要盲目的换退火温度,做个温度梯度看看

实在不行的话建议切胶回收

PCR的问题最近在扩一段果蝇基因,得用CDNA做模板大概2K,60度以下扩不出来,60度以上扩出来的全是杂带.总之大家能想到的都试过,咋回事呢?那段基因引物是不是很好设,能用的都用了,26个碱基 高中有关果蝇的遗传学问题在果蝇中,雄果蝇的Bar基因是伴性遗传的,那么携带有Bar基因的雄果蝇眼睛的表现性是A典型正常表现型B野生型的眼睛表型C小的,狭缝似地眼睛D不长眼睛选C,但题目中 果蝇的基因式 关于PCR克隆基因的引物问题想拿到一个基因的CD区,CD区一共1400bp,用引物A(上游引物),B(下游引物)扩出了1-1200bp前面一段,引物C(上游引物),D(下游引物)扩出了1000-1400bp后面一段,可是用A 果蝇的基因频率问题.已知果蝇白眼基因(b)为隐性基因,在该种群中每2500只果蝇中才有1只白眼果蝇,那么白眼b基因的基因频率为?答案是2%,好像错了吧? 果蝇的红眼对白眼为显性,且控制眼色的基因在x染色体上.下列杂交组合中,通过眼色即可直接判断果蝇性别的是( )A.杂合红眼雌果蝇*红眼雄果蝇B.白眼雌果蝇*红眼雄果蝇C.杂合红眼雌果蝇* 果蝇是研究遗传学问题的良好材料,其性别决定方式为xy型.果蝇x、y染色体有同源区段核非同源区段,如图所示,其中A与C为同源区段.已知在果蝇的性染色体上有一对基因H、h,分别控制的性状是 基因频率的问题:生物不好,为什么解析中:Xb的基因频率为20%,则雄性果蝇中XbY的基因型频率为20%?若在果蝇种群中,XB的基因频率为80%,Xb的基因频率为20%,雌雄果蝇数相等,理论上XbXb、XbY的基因 为什么果蝇控制眼色的基因在X染色体上 果蝇的白眼基因为什么在X染色体上? 自己设计了一对引物克隆一段基因,PCR出不来结果可能是什么问题? PCR引物是目的基因中的一段么,还是和目的基因中的某段是互补的? 检测到一段N端氨基酸序列DNSCTGEHARYPMVWFIK,现要作PCR扩基因,在NCBI上blast找不同源的,请问怎么设计引根据质谱检测得到一段N端氨基酸序列DNSCTGEHARYPMVWFIK,现在需要作PCR扩基因,在NCBI上blast找不到同 已知果蝇白眼b由常染色体隐性基因控制,在种群中如果每2500只果蝇中才有1只白眼果蝇,白眼基因b的频率? NCBI使用问题最近在做里氏木霉的纤维素酶(Trichoderma reesei cellulase)基因,遇到一个问题,做PCR需要引物,在NCBI上查酶基因序列时出来100多条,以前没用过NCBI,不知道应该用哪一个,请知道的生物学 在减数第一次分裂间期,因为某些原因使果蝇2号染色体上的 DNA分子缺失了一个基因,这种变异属于.A染色体变异B基因重组C基因 突变D基因重组或基因 突变 我想查一下果蝇的基因,在哪里有 特别是跟嗅觉有关的基因 用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列?0、有关PCR技术的说法,不正确的是A.PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术B.PCR技术的原理是DNA双链复